Expression hétérologue de la cyclodextrine glycosyltransférase de Paenibacillus macerans chez Escherichia coli et son application à la production d’acide 2-O-α-D-glucopyranosyl-L-ascorbique.

CONTEXTE: La cyclodextrine glucanotransférase (CGTase) peut transformer l’acide L-ascorbique (L-AA, vitamine C) en acide 2-O-alpha-D-glucopyranosyl-L-ascorbique (AA-2G), qui présente diverses applications. industries alimentaires, cosmétiques et pharmaceutiques. RÉSULTATS: Dans cette étude, le gène cgt codant l'alpha-CGTase de Paenibacillus macerans était optimisé pour les codons (opt-cgt) et cloné dans pET-28a (+) pour l'expression intracellulaire dans E. coli BL21 (DE3). L'Opt-CGT a été purifié par une résine Ni (2+) -NTA avec une récupération de 55% et l'activité spécifique a été augmentée de manière significative de 1,17 à 190,75 µmg (-1). De plus, l'enzyme a été adoptée pour transformer la L-AA en 9,1 g / L de AA-2G. Enfin, des substrats plus économiques, comprenant la bêta-cyclodextrine, l'amidon soluble, l'amidon de maïs et l'amidon de manioc pourraient également être utilisés en tant que donneurs de glycosyle. On a obtenu respectivement 4,9, 3,5, 1,3 et 1,5 g / L d'AA-2G. CONCLUSIONS: L'acide aminé N-terminal est essentiel à l'activité de la CGTase suggérée par son étude de troncature. En outre, lorsque l’Opt-CGT est flanqué d’histoires His6 sur les extrémités C et N, la récupération de la purification par la résine Ni (2 +) -NTA est sensiblement améliorée. L’alpha-cyclodextrine était le donneur de glycosyle idéal pour la production d’AA-2G. De plus, la sélection de donneurs de glycosyle à faible coût rendrait le processus de production de AA-2G plus compétitif sur le plan économique.

Source: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30170578