Les faibles rendements de synthèse de l'acide 2- O-alpha-d-glucopyranosyl-l-ascorbique (AA-2G) dérivé de l'acide l-ascorbique (l-AA) limitent son utilisation dans l'industrie alimentaire. Dans ce travail, le rendement de synthèse de AA-2G de la cyclodextrine glycosyltransférase de Bacillus stearothermophilus NO2 (CGTase) a été amélioré. Neuf résidus situés à moins de 10 A du résidu catalytique Glu (253) affichant une conservation inférieure à 30% et situés dans le sous-site accepteur ont été sélectionnés pour une mutagenèse itérative à saturation. Le meilleur mutant, K228R / M230L, produisit un rendement en AA-2G plus élevé avec la maltodextrine en tant que donneur de glucosyle que celui produit par son type sauvage parent. Les valeurs de l-AA Km du mutant K228R / M230L ont diminué de 35%, alors que celles de kcat / Km ont été multipliées par 2,69. L'analyse cinétique a indiqué que K228R / M230L présentait une spécificité améliorée de l-AA. Ces résultats démontrent que les résidus de sous-site accepteur jouent un rôle important dans la spécificité du substrat accepteur. Le mutant K228R / M230L a donné la concentration en AA-2G la plus élevée (211 g L (-1), 624 mM) rapportée à ce jour après l'optimisation des conditions de réaction.
Source: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30091914