Méthode sensible pour l'analyse simultanée de la vitamine A (VA), de la 25-hydroxyle vitamine D3 (25-OH VD3) et de l'alpha-tocophérol (VE) dans le plasma d'enfants par spectrométrie de masse à chromatographie en phase liquide-tandem (LC-MS / MS) a été développé et validé. La préparation de l'échantillon a choisi l'extraction en phase solide. 100 ml de plasma ont été mélangés avec 300 ml d'éthanol contenant 4 ml d'analytes marqués par un isotope. Après une opération en série, le surnageant a été appliqué sur la plaque d'extraction en phase solide (SPE) (plaque HLB muElution). L'éluat a été évaporé et reconstitué dans 100 ml de méthanol. Et ensuite, un échantillon reconstitué de 6 ml a été injecté dans LC-MS / MS. L'analyse quantitative a été réalisée par surveillance de réactions multiples (MRM) avec un électrospray en mode positif (ESi +). Les séparations de VA, 25-OH, VD3 et VE ont été effectuées sur une colonne analytique Phényl-Hexyle à phase inversée Acquity UPLC (CSH, 2,1 x 50 mm, 1,7 um). L'élution par gradient a été utilisée à un débit de 0,4 ml / min avec une phase mobile constituée de 0,1% de solution d'acide formique et de 0,1% d'acide formique et de formiate d'ammonium à 5 mM dans de l'acétonitrile. La durée totale de l'analyse était de 10 minutes. La méthode avait une limite de quantification (LOQ) de 10,03, 1,20 et 0,04ng / mL pour VA, 25-OH VD3 et VE dans le méthanol, respectivement. Les courbes d'étalonnage linéaires ont été ajustées sur la plage de 0,14 à 14,32 mug / ml, 1,80 à 180,29 ng / ml et de 6,03 à 602,99 ng / ml pour VA, 25-OH VD3 et VE dans du méthanol. Les coefficients de corrélation étaient supérieurs à 0,998 pour tous les analytes. Les récupérations pour tous les analytes étaient comprises entre 80 et 120%, avec des précisions entre les jours et entre les jours (présentées sous forme d'écart-type relatif,% RSD) inférieures à 10,0%. Une analyse de la VA, du 25-OH VD3 et de VE dans les infections plasmatiques récurrentes des enfants et du sang du doigt du nourrisson anémique a ensuite été réalisée à l'aide de cette méthode et d'une analyse statistique des données avec un ensemble statistique pour les sciences sociales 20.0 (SPSS 20.0). En utilisant cette méthode, plusieurs vitamines liposolubles peuvent être détectées en même temps. L'extraction en phase solide a été utilisée pour simplifier le prétraitement des échantillons. La plaque muElution utilisée ici pourrait réduire le volume de l'échantillon, seul un échantillon de 100 mL a été utilisé dans cette méthode et un échantillon reconstitué de 6 mL a été injecté dans du LC-MS / MS. Cela rend la méthode appropriée pour un prétraitement de plus grand échantillon et convient aux enfants, en particulier à la détection des échantillons de nourrissons et de nouveau-nés, chez qui le sang de circulation était faible.
Source: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29421441